Турысбекова Г.С., Махмедун А.Д., Шахмурат А.
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ МЕТОДОВОБРАБОТКИ ПРОБ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬИ ТОЧНОСТЬ ПОДСЧЁТА БАКТЕРИЙ *
Аннотация:
в работе проведено экспериментальное исследование, направленное на выявление влияния условий обработки бактериальных проб на эффективность их количественного подсчёта. Рассмотрены изменения методики, включая химическую обработку с добавлением соляной кислоты и использование различных условий окрашивания. Проанализированы визуальные и количественные характеристики бактериальных суспензий в различных сериях. На основе полученных данных проведена сравнительная оценка оседаемости и плотности бактериальных клеток. Сделаны выводы о значимости отдельных параметров методики для повышения точности подсчёта бактерий.
Ключевые слова:
бактерии, количественное определение, обработка проб, осаждение, окрашивание, соляная кислота, биореактор, сравнительный анализ
В связи с сокращением запасов богатых руд и увеличением доли труднообрабатываемого минерального сырья, особенно актуальными становятся технологии, обеспечивающие экономичную и экологически безопасную переработку. Одним из перспективных направлений в этой области является использование микроорганизмов в биогеотехнологиях, в частности — методы бактериального выщелачивания. Такой подход позволяет извлекать металлы из низкосортных и некондиционных руд без предварительного буровзрывного разрушения, что снижает капитальные затраты и упрощает технологический процесс. Учитывая растущую значимость биовыщелачивания в промышленной практике, особое внимание уделяется совершенствованию методов количественного анализа микроорганизмов, участвующих в данных процессах. В рамках исследования были отобраны пробы инокулята, содержащего активную культуру Acidithiobacillus ferrooxidans, и проведены тестовые испытания на основе образцов, полученных с участка Актогайского месторождения. [1, с. 20].Тест 1. Испытания включали две серии: «ОП-1» и «ОП-2 (HCl)». В качестве контроля HCl был добавлен к «ОП-2», чтобы убедиться в наличии мертвых бактерий. Из биореактора отобрали два образца инокулята - объёмом 50 мл и 40 мл. Бактериальные подсчеты были проведены и представлены в таблице 1, ниже. Бактериальная плотность пробы биореактора составила 2,36E+08 клетки/мл +/- 1,54E+07. В качестве контрольного образца к пробе «ОП-2 (HCl)» добавляли 10 мл 38 % - ной соляной кислоты (HCl). Индикаторный раствор готовили из 900 мг эритрозина В и 10 мл дистиллированной воды, смесь перемешивали в течение 3 минут, получая гетерогенный раствор. Затем с помощью микропипетки в пробирки «ОП-1» и «ОП-2 (HCl)» вносили по 100 мл индикаторного раствора. Образцы тщательно встряхивали в течение 30 секунд, после чего оставляли покоиться 5 минут. В течение этого времени наблюдалось видимое оседание взвеси в каждой пробирке.Таблица 1. Результаты подсчета бактерий в пробе биореактора.На рисунке 1 представлены пробирки после 5-минутного оседания.Рисунок 1. Пробирки после 5-минутного оседания.В образце «ОП-1» раствор приобрёл тёмно-красную окраску, тогда как в образце «ОП-2 (HCl)» после пятиминутного осаждения наблюдалась светло-красная окраска. Далее пробы подвергли микроскопическому исследованию с использованием светового микроскопа. Результаты анализа представлены на рисунках 2 и 3.Рисунок 2. Микроскопический анализ «ОП-1».Рисунок 3. Микроскопический анализ «ОП-2».Микроскопический анализ выявил, что в серии «ОП - 2 (HCl)» доля нежизнеспособных клеток существенно выше, чем в серии «ОП - 1». Следовательно, добавление HCl было успешным в уничтожении бактерий, однако не всех бактерий. Полученные данные свидетельствуют о значимости эффекта и позволяют признать контрольное испытание успешным.Тест 2. В рамках изменения методики вместо статического осаждения использовали центрифугирование, данная серия испытаний обозначена идентификатором «ОП-3».Один 50-мл образец отобрали из того же биореактора, что и в тесте 1, поэтому плотность бактерий считается эквивалентной. Индикаторный раствор готовили, растворяя 900 мг эритрозина В в 10 мл дистиллированной воды, затем по 100 µL этого раствора вводили в пробирки с 50-мл пробами и встряхивали их в течение 3 минут. После перемешивания образцы центрифугировали при 1750 об/мин в течение 15 минут. По окончании центрифугирования наблюдалось заметно более выраженное оседание, чем в испытаниях «ОП-1» и «ОП-2 (HCl)». Результаты показаны на рисунке 4.Рисунок 4. Пробирки после оседания "ОП-3".После центрифугирования образец «Т3» приобрёл жёлтую окраску. Микроскопический анализ образца приведён на рисунке 5.Рисунок 5. Микроскопический анализ «ОП-3».Таблица 2. Результаты подсчета бактерий в пробе биореактора.Наблюдалось снижение плотности бактерий на 36 %, это ожидается в любом биореакторе, следовательно, бактериальная жизнеспособность в данном реакторе составляет 64 %.
Номер журнала Вестник науки №5 (86) том 3
Ссылка для цитирования:
Турысбекова Г.С., Махмедун А.Д., Шахмурат А. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ МЕТОДОВОБРАБОТКИ ПРОБ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬИ ТОЧНОСТЬ ПОДСЧЁТА БАКТЕРИЙ // Вестник науки №5 (86) том 3. С. 1622 - 1629. 2025 г. ISSN 2712-8849 // Электронный ресурс: https://www.вестник-науки.рф/article/23193 (дата обращения: 20.07.2025 г.)
Вестник науки © 2025. 16+